Microscopía de la muestra

Materiales. Equipamiento

  • Ansa
  • Cabina de bioseguridad
  • Incinerador de ansas
  • Microscopio con lente de inmersión 100X de magnificación
  • Portaobjeto de vidrio

Nota: el uso de cabina de bioseguridad evitará la contaminación del cultivo o muestra, así como protegerá al operador

Reactivos

  • Aceite de inmersión
  • Equipo de colorantes para Gram

Procedimiento

Día 1 Comentarios
• Colocar 5 a 6 gotas de la muestra en un portaobjeto y extender
• Dejar secar dentro de la cabina de bioseguridad
• Colorear con la técnica de Gram, observar e interpretar
• La observación de cualquier número de cocobacilos Gram positivos debe ser informado inmediatamente al médico tratante
El número de L. monocytogenes en el LCR puede ser menor a 103 UFC/ml, por lo tanto la concentración por centrifugación para la coloración de Gram es importante para el diagnóstico rápido

 

Aislamiento e identificación

Materiales. Equipamiento

  • Ansa
  • Cabina de bioseguridad
  • Incinerador de ansas
  • Estufa de cultivo 35 – 37 ºC con atmósfera de 5% de CO2

Medios de cultivo

  • Agar tripteína soya
  • Agar tripteína soya con 5% sangre ovina
  • Caldo nutritivo

Procedimiento

Día 1 Comentarios
• Centrifugar la muestra para concentrar
• Aspirar el fluido desde el fondo del tubo utilizando una pipeta estéril y colocar 2 ó 3 gotas en una placa de agar tripticasa soja con sangre ovina al 5% y en una placa de agar tripticasa soya sin sangre. Sembrar en técnica de aislamiento en cuatro cuadrantes
• Inocular también en caldo tioglicolato o caldo nutritivo. Incubar placas a 35 - 37 ºC en atmósfera de 5% de CO2 por 24 - 48 horas.
Incubar caldos a 35 – 37 ºC en atmósfera normal
El número de L. monocytogenes en el LCR
puede ser menor a 103 UFC/ml, por lo tanto la concentración por centrifugación mejora la recuperación por cultivo
Día 2 Comentarios
• Examinar las placas y caldos a las 24 horas para detectar evidencia macroscópica de desarrollo bacteriano. En caso negativo, reincubar
• Realizar coloración de Gram y prueba de catalasa de colonias sospechosas en placa de agar tripteína soya
• Subcultivar en estría de agar tripteína soya
Colonias sospechosas: pequeñas convexas,
transparentes-grisáceas con beta hemólisis difusa
La observación microscópica de bacilos pequeños o cocobacilos gram positivos, la presencia de colonias pequeñas con beta hemólisis difusa y catalasa positiva representa una fuerte sospecha de L. monocytogenes que debería ser informada al médico tratante en forma inmediata
Día 3 Comentarios
• A partir del subcultivo en estría proseguir la identificación confirmatoria En caso de microscópica positiva a partir del Gram directo de la muestra con cultivos negativos a las 24 horas, reincubar las placas y caldos por al menos una semana y observar diariamente

 

Fuente: Servicio Bacteriología Especial Departamento de Bacteriología Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas A.N.L.I.S. “Dr. Carlos G. Malbrán” (2008). Manual de Procedimientos Aislamiento, identificación y caracterización de Listeria monocytogenes. Buenos Aires: Callejo, R. , Prieto, M. , Martínez, C. , Aguerre, L. , Rocca, F. y Martínez G.

Pruebas

  • Reducción de Telurito de Potasio +

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