La difteria es una enfermedad contagiosa del hombre en la cual Corynebacterium diphtheriae coloniza las membranas mucosas de las fauces y la laringe, extendiéndose a la traquea. Cuando la colonización se produce en el tejido subcutáneo de la piel, puede haber difteria cutánea. Se disemina por las gotitas de secreciones respiratorias o por el contacto con individuos susceptibles; los bacilos luego se desarrollan en las mucosas o en abrasiones en la piel y los que son toxígenos comienzan a producir toxina.

Loeffler tuvo conocimiento que los bacilos diftéricos que crecen en vitro toman a menudo una forma peculiar. En frotis de casos de difteria clínica se pudo demostrar bacilos solamente en algunos casos, no fue posible aislar el agente causal en todos. En sus estudios también aisló bacilos de difteria de un niño normal y así comprendió que el aislamiento de bacilos diftéricos de la garganta humana no significa necesariamente que esa garganta sea diftérica. Observó que la difteria y la faringitis estreptocócica podrián existir juntas. 

LECTURA DE CULTIVOS

C. diphteriae no se busca en el diagnóstico de laboratorio común a menos que se haya producido una muerte por difteria. Son útiles para confirmar la impresión clínica y tienen importancia epidemiológica. El tratamiento específico nunca debe demorarse por los resultados de laboratorio si el cuadro clínico es muy sugestivo de difteria.  

Procedimiento:

1. Los frotis se preparan con membranas diftéricas, frotis de dacrón de la nariz, la faringe o de otras lesiones sospechosas, el frotis luego debe colocarse en medios de transporte semisólidos como Amies.

2. La membrana diftérica (seudomembrana) el tratamiento que se de radica el éxito de la muestra, removemos con asa bacteriológica de acero. Una parte de la seudomembrana así obtenidos se usa para inocular:

2.1. En agar inclinado de medio loeffler suplementado con 2.5g de K2HPO4/litro incubado a una temperatura de 37°C, las corinebacterias proliferan con mayor rapidez que otros microorganismos respiratorios. C. diphtheriae y otras corinebacterias se desarrollan en medio aerobio en casi todos los medios de laboratorio ordinarios. En un término de 12 a 18 h, el cultivo inclinado de Loeffler puede producir microorganismos de morfología “difteroide” característica. 

2.2. Una placa con agar sangre (para descartar estreptococos hemolíticos), las colonias de C. diphtheriae son pequeñas, granulosas y grises, con bordes irregulares y pueden tener pequeñas zonas de hemólisis.

2.3. Una placa de agar telurito o telurito Muller-Miller incubado a una temperatura de 37°C, en telurita de potasio que contiene agar las colonias son de color pardo a negro con un halo negro pardusco debido a que la telurita se reduce dentro de la célula (estafilococos y estreptococos también producen colonias de color negro). Las colonias en medio de telurita son lo suficientemente definidas para el reconocimiento de C. diphtheriae.

Los medios se inoculan para enriquecimiento del número de bacilos. Las corinebacterias desarrollan en medio rico en CO2, con 10% en aire. Una jarra con vela da niveles satisfactorios de CO2.

Luego de las placas con medios preparar frotis:

La coloración de Gram, y

La coloración con azul de metileno alcalino para observar diferentes clases de bacterias presentes en el exudado. Si algunos de los bacilos pleomórficos (bacilos con manchitas tienden inflarse como globos en un extremo de la células y toman la forma de una clava: corine, coreniformes) fusiformes presentes contienen o no gránulos de polifosfato( metacromáticos), los gránulos sobresalen como cuerpos refráctiles rojizos sobre un fondo azul. Las corinobacterias que crecen en medio pobre en fosfato producen muy pocos gránulos metacromáticos; esto explica el número limitado de gránulos que se encuentran en C. diphtheriae en frotis de tejidos. 

CONCLUSIÓN

Una serie de frotis presuntamente positivos debe tener una correlación con el crecimiento de bacterias similares en el agar inclinado de Loeffler inoculado, porque favorece a C. diphtheriae. De este modo el diagnóstico de difteria puede requerir un gran juicio clínico apoyado en una bacteriología minuciosa.

Colonias corinebacterias sospechosas se suspenden en caldo estéril y vuelvan a sembrarse en placas esterilazadas. Una vez que las colonias aisladas han crecido se eligen para preparar cultivos de reserva con fines de mayor propagación e identificación y tipificación.

Biotipos de C. diphtheriae

Fuente:
Braude, A. (1984). Microbiología Clínica. Argentina: Editorial Médica Panamericana.
Mietzner, T. , Brooks,G. , Morse, S. , Carrol, K. y Butel,J. (2011). Microbiología Médica de Jawetz, Melnick y Adelberg. México: McGraw-Hill. 

Pruebas

  • Licuación de Gelatina +

    PROCEDIMIENTO
    •Sembrar la cepa en medio gelatina
    •Incubar a 37°C por 24 horas.
    •Poner en refrigeración por 1 a 2
    Read More
  • 1
  • 2
  • 3
  • 4
  • 5
  • 6
  • 7
  • 8
  • 9
  • 10