Prueba de reducción del nitrato. Fuente: Manual de Procedimientos Bacteriológicos en Infecciones Intrahospitalarias. MINSA-INS. 2005
FUNDAMENTO
•Para esta prueba se utilizó el Caldo Nitrato y los reactivos A y B de Peter Gries. En este caldo hay presencia de nitrato,el cual por metabolismo de la bacteria pasaría a nitrito y puede ser que hasta amonio y nitrógeno,al agregar los reactivos la aparición de un color rojizo-grosella indicaría la presencia de nitritos,la falta de este color indicará que el nitrato no se ha reducido o que el nitrito ha sido reducido hasta amonio.
MEDIOS Y REACTIVOS
• Caldo nitrato
– Preparar de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
– Repartir 1 mL por tubo.
– Autoclavar a 121 °C, 15 libras / pulg2, 15 minutos.
– Conservar los medios refrigerados a 4 – 10 °C
• Caldo nitrato
– Preparar de acuerdo con las instrucciones del fabricante.
– Repartir 1 mL por tubo.
– Autoclavar a 121 °C, 15 libras / pulg2, 15 minutos.
– Conservar los medios refrigerados a 4 – 10 °C
• Reactivo A
– a –naftilamina 5 g
– Dimetil-a naftilamina 6 g
– Acido acético (5N), 30% 1000 mL
– Dimetil-a naftilamina 6 g
– Acido acético (5N), 30% 1000 mL
– Disolver cualquiera de las sustancias en menos de 1000 mL de ácido acético 5N por medio de un suave calentamiento.
– Pasar la solución a un frasco volumétrico de 1 litro y completar a 1000 mL con el ácido acético 5N.
– Filtrar la solución.
– Guardar refrigerado (4 °C) en un frasco ámbar.
• Reactivo B
– Disolver el ácido sulfanílico en menos de 1000 mL de ácido acético 5N.
– Traspasar la solución a un frasco volumétrico de un libro y agregar ácido acético 5 N c.s.p 1000 mL y guardar refrigerado (4 °C) en un frasco ámbar.
– Ambos reactivos se mantienen estables por lo menos tres meses.
– Pasar la solución a un frasco volumétrico de 1 litro y completar a 1000 mL con el ácido acético 5N.
– Filtrar la solución.
– Guardar refrigerado (4 °C) en un frasco ámbar.
• Reactivo B
– Disolver el ácido sulfanílico en menos de 1000 mL de ácido acético 5N.
– Traspasar la solución a un frasco volumétrico de un libro y agregar ácido acético 5 N c.s.p 1000 mL y guardar refrigerado (4 °C) en un frasco ámbar.
– Ambos reactivos se mantienen estables por lo menos tres meses.
PROCEDIMIENTO
•Sembrar las cepas en caldo nitrato
•Incubar a 37°C por 24 a 48 horas.
•Agregar reactivos A y B de Peter Gries.
•Observar coloración.
RESULTADOS
• Primera prueba:
Positivo: cambia a un color rojo dentro de 30 – 60 segundos (prueba completa).
Negativo: no cambia de color.
• Segunda prueba
Agregar aproximadamente 20 mg de polvo de zinc, y observa el color en el término de 5–10 minutos.
Positivo: no hay desarrollo de color. El nitrato ha sido reducido a nitrógeno libre (ausencia de nitrito en el medio).
Negativo: color rosado rojo intenso, el nitrato no fue reducido por el organismo (el zinc redujo el nitrato en nitrito).
• Primera prueba:
Positivo: cambia a un color rojo dentro de 30 – 60 segundos (prueba completa).
Negativo: no cambia de color.
• Segunda prueba
Agregar aproximadamente 20 mg de polvo de zinc, y observa el color en el término de 5–10 minutos.
Positivo: no hay desarrollo de color. El nitrato ha sido reducido a nitrógeno libre (ausencia de nitrito en el medio).
Negativo: color rosado rojo intenso, el nitrato no fue reducido por el organismo (el zinc redujo el nitrato en nitrito).
Fuente: Manual de Procedimientos Bacteriológicos en Infecciones Intrahospitalarias. MINSA-INS. 2005
pruebas bacteriológicas, cocos g+, reduccion de nitratos a nitritos
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