Aislamiento e identificación

Materiales. Equipamiento
• Ansa
• Cabina de bioseguridad
• Incinerador de ansas
• Estufa de cultivo 35 – 37 ºC
• Microscopio con lente de inmersión 100X de magnificación
• Portaobjeto de vidrio

Consideraciones de bioseguridad
• Consideraciones generales para patógenos clase II.
• Utilizar cabina de bioseguridad para prácticas microbiológicas con potencial formación de aerosoles.
• Utilizar siempre guantes
• La presencia de mujeres embarazadas e individuos potencialmente inmunodeprimidos debe estar
absolutamente prohibida en áreas donde se manipule Listeria monocytogenes

Reactivos y Medios de cultivo
• Aceite de inmersión
• Agar tripteína soya
• Agar tripteína soya con 5% sangre ovina
• Caldo Fraser
• Caldo nutritivo
• Medios selectivos (agar Oxford modificado MOX)
• Equipo para coloración de Gram
• Peróxido de hidrógeno al 3%

Procedimiento

Día 1 Comentarios
• Colocar 1 g o 1 ml de materia fecal en 10 ml de caldo UVM
• Incubar 24 horas a 30 ºC 
 
Día 2 Comentarios
 • Sembrar 0.1 ml de UVM en medio selectivo agar MOX
• Sembrar 0.1 ml de UVM en 10 ml de caldo Fraser
• Incubar a 30 ºC por 24 horas
 
Día 3 Comentarios
 • Observar presencia de colonias sospechosas en el agar Oxford y subcultivar hasta 5 colonias en medio sólido (agar sangre, agar tripticasa soya), y medio líquido (caldo nutritivo). Incubar medios sólidos a 35 ºC por 18-24 horas y medio líquido a 22 ºC
• Sembrar 0.1 ml de caldo Fraser en agar MOX e incubar a 30ºC por 24 horas
A las 24 horas las colonias típicas de
L. monocytogenes en agar MOX, son pequeñas, rodeadas de halo de ennegrecimiento debido a la hidrólisis de esculina 
Día 4  Comentarios
 • Observar beta hemólisis, realizar prueba de catalasa coloración de gram y observar movilidad en fresco
• Si el desarrollo de colonias sospechosas en agar selectivo es negativo a las 24 horas, observar nuevamente y en el caso de aparición de colonias proseguir como descripto en día 3
La observación de bacilos o cocobacilos gram positivos, móviles, beta hemolíticos, catalasa positiva, indica sospecha de Listeria monocytogenes.
Confirmar identificación con pruebas

Pruebas

  • Licuación de Gelatina +

    PROCEDIMIENTO
    •Sembrar la cepa en medio gelatina
    •Incubar a 37°C por 24 horas.
    •Poner en refrigeración por 1 a 2
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