Procesamiento de hemocultivo en el laboratorio
Materiales
- Ansa
- Descartador de agujas
- Estufa 35-37 ºC
- Incinerador de ansas
- Jeringa de 3 ml con aguja
- Placas con agar tripticasa soya
- Placas con agar tripticasa soya con sangre ovina al 5%
Procedimiento
- Incubar las botellas de hemocultivo a 35 ºC durante 5 días.
- Mantener las condiciones de incubación para permitir la recuperación del microorganismo y en lo posible incubar con agitación o rotación de las botellas.
- Examinar las botellas diariamente tanto si la detección de desarrollo positivo es automatizada o por inspección visual.
En caso de sistemas manuales de detección de desarrollo, realizar al menos un subcultivo a ciegas en agar sólido a partir de las botellas que no presentan signos visibles de desarrollo bacteriano
En caso de aparición de signos de desarrollo bacteriano en la botella, subcultivar inmediatamente en agar sangre y realizar un extendido en portaobjeto para coloración de gram
Caracterización inicial y reporte de resultados
Materiales. Equipamiento
- Ansa
- Cabina de bioseguridad
- Incinerador de ansas
- Microscopio con lente de inmersión 100X de magnificación
- Portaobjeto de vidrio
NOTA: el uso de cabina de bioseguridad evitará la contaminación del cultivo o la muestra, así como protegerá al operador
Reactivos y medios
- Aceite de inmersión
- Agar tripteína soya con 5 % de sangre ovina para prueba de CAMP
- Bilis esculina agar
- Equipo colorantes para Gram
- Estrías de agar tripticasa soya
- Medio SIM
- Peróxido de hidrógeno al 3% (prueba de catalasa)
Procedimiento
| Día 1 | Comentarios |
|
• Observación de bacilos pequeños o cocobacilos gram positivos
• Desarrollo de colonias pequeñas con beta hemólisis positiva
• Siembra de bilis esculina, prueba de CAMP y medio SIM a temperatura ambiente
|
En los primocultivos, muchas veces L. monocytogenes no evidencia beta hemólisis Las pruebas bioquímicas confirmatorias |
| Día 2 | |
| • Bilis esculina positiva, movilidad positiva (“paraguas”), prueba de catalasa positiva a partir de medio sin sangre | Identificación presuntiva de L. monocytogenes Confirmar pruebas bioquímicas |
Fuente: Servicio Bacteriología Especial Departamento de Bacteriología Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas A.N.L.I.S. “Dr. Carlos G. Malbrán” (2008). Manual de Procedimientos Aislamiento, identificación y caracterización de Listeria monocytogenes. Buenos Aires: Callejo, R. , Prieto, M. , Martínez, C. , Aguerre, L. , Rocca, F. y Martínez G.
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