Procesamiento de hemocultivo en el laboratorio

Materiales

  • Ansa
  • Descartador de agujas
  • Estufa 35-37 ºC
  • Incinerador de ansas
  • Jeringa de 3 ml con aguja
  • Placas con agar tripticasa soya
  • Placas con agar tripticasa soya con sangre ovina al 5%

Procedimiento

  • Incubar las botellas de hemocultivo a 35 ºC durante 5 días.
  • Mantener las condiciones de incubación para permitir la recuperación del microorganismo y en lo posible incubar con agitación o rotación de las botellas.
  • Examinar las botellas diariamente tanto si la detección de desarrollo positivo es automatizada o por inspección visual.

En caso de sistemas manuales de detección de desarrollo, realizar al menos un subcultivo a ciegas en agar sólido a partir de las botellas que no presentan signos visibles de desarrollo bacteriano

En caso de aparición de signos de desarrollo bacteriano en la botella, subcultivar inmediatamente en agar sangre y realizar un extendido en portaobjeto para coloración de gram 

Caracterización inicial y reporte de resultados

Materiales. Equipamiento

  • Ansa
  • Cabina de bioseguridad
  • Incinerador de ansas
  • Microscopio con lente de inmersión 100X de magnificación
  • Portaobjeto de vidrio

NOTA: el uso de cabina de bioseguridad evitará la contaminación del cultivo o la muestra, así como protegerá al operador

Reactivos y medios

  • Aceite de inmersión
  • Agar tripteína soya con 5 % de sangre ovina para prueba de CAMP
  • Bilis esculina agar
  • Equipo colorantes para Gram
  • Estrías de agar tripticasa soya
  • Medio SIM
  • Peróxido de hidrógeno al 3% (prueba de catalasa) 

 

Procedimiento

Día 1 Comentarios
• Observación de bacilos pequeños o cocobacilos gram positivos
• Desarrollo de colonias pequeñas con beta hemólisis positiva
• Siembra de bilis esculina, prueba de CAMP y medio SIM a temperatura ambiente
En los primocultivos, muchas veces L. monocytogenes no evidencia beta hemólisis
Las pruebas bioquímicas confirmatorias
Día 2  
• Bilis esculina positiva, movilidad positiva (“paraguas”), prueba de catalasa positiva a partir de medio sin sangre Identificación presuntiva de L. monocytogenes
Confirmar pruebas bioquímicas

 

Fuente: Servicio Bacteriología Especial Departamento de Bacteriología Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas A.N.L.I.S. “Dr. Carlos G. Malbrán” (2008). Manual de Procedimientos Aislamiento, identificación y caracterización de Listeria monocytogenes. Buenos Aires: Callejo, R. , Prieto, M. , Martínez, C. , Aguerre, L. , Rocca, F. y Martínez G.

Pruebas

  • Producción de Hemolisina +

     

    α hemólisis en placa estriada y puncionada ligero aclaramiento amarillo verde de las estrias y punciones.

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