Colonias de Pseudomonas aeruginosa en agar Mc Conkey. Fuente: Manual de Procedimientos Bacteriológicos en Infecciones Intrahospitalarias. MINSA-INS. 2005
Pseudomonas aeruginosa es fácilmente reconocida en medios de aislamiento primario por sus características:
- Morfología de la colonia
- Producción de pigmentos difusibles si están presentes.
- Olor característico.
- Producción de pigmentos difusibles si están presentes.
- Olor característico.
PROCEDIMIENTO
a)Identificar la colonia sospechosa que se encuentra en la placa de agar Mc Conkey.
b) Esterilizar al rojo vivo el asa de siembra recta en un mechero de Bunsen.
c) Enfriar el asa.
d) Obtener la colonia seleccionada con el asa recta, tratando de no tocar el fondo del medio de cultivo ni otra colonia vecina.
e) Sembrar por estría en los medios diferenciales empezando por el agar citrato (en la superficie), TSI, LIA (introduciendo el asa por el centro hasta tocar el fondo del tubo, retirar por el mismo trazo y sembrar en estría la parte inclinada), caldo para la prueba de indol y caldo nitrato.
f) Sembrar por puntura en el centro del agar gelatina (hasta una profundidad de 1,5 cm – 2,5 cm) y agar movilidad hasta una
profundidad aproximada de 1,5 cm.
g) Quemar el asa y dejar enfriar.
h) Con el asa recta obtener la misma colonia trabajada y cogerla tratando de no tocar el fondo del medio de cultivo ni otra colonia vecina y sembrar haciendo pequeños trazos en el extremo de dos placas de TSA o Mueller Hinton (sembrar solo una placa de TSA o Mueller Hinton si no se dispone de incubadora a 42 °C).
i) Utilizando un asa de siembra en aro estéril y tomando como referencia central el inóculo de la colonia, realizar la siembra por dispersión agotamiento en los cuadrantes de la placa.
j) Incubar a 35 – 37 °C de 18 a 24 horas a excepción de una placa de TSA que debe ser incubada a 42 °C.
c) Enfriar el asa.
d) Obtener la colonia seleccionada con el asa recta, tratando de no tocar el fondo del medio de cultivo ni otra colonia vecina.
e) Sembrar por estría en los medios diferenciales empezando por el agar citrato (en la superficie), TSI, LIA (introduciendo el asa por el centro hasta tocar el fondo del tubo, retirar por el mismo trazo y sembrar en estría la parte inclinada), caldo para la prueba de indol y caldo nitrato.
f) Sembrar por puntura en el centro del agar gelatina (hasta una profundidad de 1,5 cm – 2,5 cm) y agar movilidad hasta una
profundidad aproximada de 1,5 cm.
g) Quemar el asa y dejar enfriar.
h) Con el asa recta obtener la misma colonia trabajada y cogerla tratando de no tocar el fondo del medio de cultivo ni otra colonia vecina y sembrar haciendo pequeños trazos en el extremo de dos placas de TSA o Mueller Hinton (sembrar solo una placa de TSA o Mueller Hinton si no se dispone de incubadora a 42 °C).
i) Utilizando un asa de siembra en aro estéril y tomando como referencia central el inóculo de la colonia, realizar la siembra por dispersión agotamiento en los cuadrantes de la placa.
j) Incubar a 35 – 37 °C de 18 a 24 horas a excepción de una placa de TSA que debe ser incubada a 42 °C.
Nota: De no disponer de estufa a 42 °C, una opción es utilizar un baño maría graduado a 42 °C y sembrar el cultivo en estudio en TSB o BHI e incubarlo de 18 a 24 horas.
Fuente: Manual de Procedimientos Bacteriológicos en Infecciones Intrahospitalarias. MINSA-INS. 2005