Test de esculina
Fuente: Calle, S. Atlas de Bacteriología. FAMV-UNMSM. 2012
FUNDAMENTO
Se basa en la capacidad que tienen ciertas bacterias, en particular los Estreptococos del grupo D y especies de Enterococcus spp, de tolerar grandes concentraciones de bilis (40%). Para detectar esta alta tolerancia se agrega esculina, la cual es hidrolizada si la bacteria se desarrolla. La hidrólisis de la esculina da como resultado la formación de glucosa y un compuesto denominado esculetina. Esta a su vez reacciona con los iones férricos para formar un complejo negro.
Se basa en la capacidad que tienen ciertas bacterias, en particular los Estreptococos del grupo D y especies de Enterococcus spp, de tolerar grandes concentraciones de bilis (40%). Para detectar esta alta tolerancia se agrega esculina, la cual es hidrolizada si la bacteria se desarrolla. La hidrólisis de la esculina da como resultado la formación de glucosa y un compuesto denominado esculetina. Esta a su vez reacciona con los iones férricos para formar un complejo negro.
PROCEDIMIENTO
Método 1
Rotular un tubo para coagulasa
Agregar 100 mL de agua destilada estéril.
Tomar 2 ó 3 colonias de un cultivo fresco y hacer una suspensión homogénea.
Con una pinza estéril colocar el disco de bilis esculina dentro del tubo que contiene la suspensión.
Incubar a una temperatura de 35-37°C durante 4 horas.
Realizar la lectura.
Agregar 100 mL de agua destilada estéril.
Tomar 2 ó 3 colonias de un cultivo fresco y hacer una suspensión homogénea.
Con una pinza estéril colocar el disco de bilis esculina dentro del tubo que contiene la suspensión.
Incubar a una temperatura de 35-37°C durante 4 horas.
Realizar la lectura.
Método 2
a) Inocular el cultivo en estudio haciendo estrías sobre la superficie del pico de flauta o de la placa de agar bilis esculina.
b) Incubar a 35 - 37 °C hasta 72 horas.
c) Se puede controlar periódicamente y esperar hasta las 72 horas antes de informar como negativo.
b) Incubar a 35 - 37 °C hasta 72 horas.
c) Se puede controlar periódicamente y esperar hasta las 72 horas antes de informar como negativo.
LECTURA
Método 1
Observar en el tubo ennegrecimiento debido a la esculetina que reacciona con los iones férricos.
Método 2
Positivo: En tubo: Ennegrecimiento difuso en el agar inclinado.
En placa: Se observa un halo negro o marrón alrededor de las colonias en la placa.
Negativo: No se produce ennegrecimiento del medio o ennegrecimiento de menos de la mitad del tubo después de 72 horas de incubación.
Positivo: En tubo: Ennegrecimiento difuso en el agar inclinado.
En placa: Se observa un halo negro o marrón alrededor de las colonias en la placa.
Negativo: No se produce ennegrecimiento del medio o ennegrecimiento de menos de la mitad del tubo después de 72 horas de incubación.
Fuente: Manual de Procedimientos de Bacteriología Médica del CNDR/MINSA edición 2004. Manual de Procedimientos Bacteriológicos en Infecciones Intrahospitalarias. MINSA-INS. 2005
