FUNDAMENTO
Con este medio evalúa la capacidad de un microorganismo de hidrolizar almidón por acción enzimática. Se utilizan placas con medio de cultivo que contiene almidón al 0,1%. Utiliza lugol como revelador (solución de yodo utilizada en coloración de Gram)
COMPOSICIÓN
Agar-agar.......................................................20 g
Extracto de carne ..............................................3 g
Cloruro de sodio ...............................................5 g
Almidón soluble ............................................... 10 g
Agua destilada..............................................1000 ml
Como medio basal pueden utilizar medios comerciales (Agar infusión corazón, agar tripteína soya, agar Base Sangre, otros).
PREPARACIÓN
Preparación del medio:
Solución A: en 500 ml de agua destilada disolver el agar por calentamiento.
Solución B: disolver el almidón en 250 ml de agua destilada, calentando suavemente. No calentar en exceso debido a que el sobrecalentamiento puede hidrolizar el almidón. Enfriar la solución A a 60 ºC. Mezclar la solución A y la solución B y completar con el agua destilada restante. Ajustar pH a 7.2 – 7.5. Fraccionar volúmenes adecuados para plaquear. Esterilizar 15 minutos a 121 ºC. Plaquear.
Reactivo revelador: Solución de Lugol
Cristales de yodo............................................. 5 g
Ioduro de potasio............................................. 10 g
Agua destilada................................................100 ml
Preparación: Solución madre: Disolver el ioduro de potasio en agua destilada. Agregar los cristales lentamente y agitar hasta disolución. Filtrar y almacenar en frasco color caramelo.
Solución de trabajo: Diluir la solución madre 1:5 con agua destilada. Fraccionar en frascos color caramelo. Preparar solución fresca cada 3 semanas.
REALIZACIÓN DE LA PRUEBA
Inocular la superficie del medio en spot o en línea con la cepa a estudiar. Pueden probarse varias cepas en una misma placa. Incubar a 35 ºC durante 48 horas.
LECTURA E INTERPRETACIÓN
Inundar la placa con lugol. La placa vira al color azul por la reacción del lugol con el almidón. Una zona clara alrededor de la siembra indica que el microorganismo ha hidrolizado el almidón.
Reacción positiva: zona clara alrededor del cultivo.
CONTROL DE CALIDAD
Control positivo: Bacillus cereus ATCC 11778
Control negativo: Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853
Fuente: Servicio Bacteriología Especial Departamento de Bacteriología Instituto Nacional de Enfermedades Infecciosas A.N.L.I.S. “Dr. Carlos G. Malbrán” (2008). Manual de Procedimientos Aislamiento, identificación y caracterización de Listeria monocytogenes. Buenos Aires: Callejo, R. , Prieto, M. , Martínez, C. , Aguerre, L. , Rocca, F. y Martínez G.
