Prueba Coagulasa
Fuente Nattaly Torrico Villarroel
 
FUNDAMENTO
•La coagulasa es una enzima que coagula el plasma oxalatado o citratado en presencia de un factor contenido en muchos sueros. Este factor sérico reacciona con la coagulasa para generar esterasa como actividades de coagulación,de una manera semejante a la activación de la Protrombina hasta Trombina.  
• Se realiza para comprobar la facultad de la bacteria de coagular el plasma por acción de la enzima coagulasa, la cual aumenta la velocidad de coagulación del plasma. El resultado final es la formación de un coágulo de fibrina.
– Prueba en lámina (detecta factor de aglutinación o coagulasa ligada).
– Prueba en tubo (detecta coagulasa libre y ligada).
• La prueba de coagulasa en tubo es definitiva, y la prueba de coagulasa en lámina puede ser usada como una técnica de tamizaje rápida para la identificación de S. aureus. Todas las pruebas negativas en lámina deben repetirse utilizando la técnica en tubo.

REACTIVO
Plasma liofilizado de conejo. (Reconstituir de acuerdo con las instrucciones del fabricante.)
Nota: El plasma humano no debe ser usado a menos que haya sido cuidadosamente probado de no contener algún agente infeccioso, capacidad de coagulación e inhibidores.

PRUEBA EN LÁMINA
La prueba de la coagulasa en lámina es un método únicamente presuntivo. Por esa razón todos los resultados negativos o retardados (más de 20 segundos) deben ser confirmados por la prueba en tubo.
Procedimiento
• Preparar una suspensión densa de la colonia en agua destilada o solución fisiológica mezclando bien para homogenizar.
• Si hubiera autoaglutinación, no continuar y realizar la prueba en tubo.
• Agregar una gota de plasma y mezclar con movimientos circulares.
• Observar la formación de aglutinación o precipitado dentro de 20 segundos.
• Todas las pruebas negativas y positivas retardadas (20 a 60 segundos) deben confirmarse con la prueba en tubo.
Nota: Es una prueba bastante rápida y económica, pero si hubiese de 10 a 15% de S. aureus puede dar un resultado negativo, por ello, todos los resultados negativos deben repetirse utilizando la técnica en tubo.

PRUEBA EN TUBO
Procedimiento
• Transferir una colonia aislada del agar sangre de carnero a 0,5 mL de plasma reconstituido (en un tubo de vidrio estéril de 13 x 100).
• Girar el tubo suavemente para lograr la suspensión del organismo. No agitar.
• Incubar la mezcla a 35 - 37 °C (en baño maría de preferencia) por 4 horas; observar si hay formación de coágulo inclinando lentamente el tubo.
• Observar cuidadosamente si hay formación de coágulo inclinando lentamente el tubo (sin agitar) en intervalos de hasta 4 horas. Cualquier grado de coagulación es una prueba positiva.
• La mayoría de los S. aureus formarán coágulo en una hora.
• Si es negativa a las 4 horas, seguir incubando hasta el día siguiente a temperatura ambiente. Esto es recomendado porque un pequeño número de cepas de S. aureus puede requerir más de cuatro horas para la formación del coágulo. Considerar que Staphylococcus produce fibrinolisina, la cual puede lisar el coágulo.
Nota: Es preferible utilizar baño maría para esta prueba . 

Fuente: Manual de Procedimientos Bacteriológicos en Infecciones Intrahospitalarias. MINSA-INS. 2005

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